Ученые успешно разработали новый метод подсчета меченых белков в живых клетках, который может стать стандартным и ценным инструментом в биомедицинских исследованиях.
Эта мощная новая технология, известная как Оценка маркировки белков (ProDOL), обеспечивает мощный и универсальный подход для точного определения эффективности маркировки, количества белков, меченных флуоресцентными метками в живых клетках, в микроскопе, что является важнейшим аспектом количественного определения белков в биологических процессах. исследовать. .
Метод был разработан группой исследователей из сердечно-сосудистых наук и Школы химии Бирмингемского университета в сотрудничестве с несколькими международными институтами. Результаты, подчеркивающие потенциал ProDOL по значительному повышению точности и надежности маркировки белков, были опубликованы в недавнем исследовании.
Флуоресцентная микроскопия уже давно стала краеугольным камнем биомедицинских исследований, позволяя ученым обнаруживать и анализировать белки внутри клеток. Однако точность этих анализов во многом зависит от способности определять количество флуоресцентно меченных белков — параметра, известного как степень мечения (DOL). Современные методы измерения степени маркировки имеют ограничения, что часто приводит к переменной эффективности маркировки и неспецифическим сигналам.
ProDOL предназначен для решения этих проблем, предоставляя быстрый и надежный способ измерения эффективности маркировки. Этот инструмент позволяет оптимизировать стратегии маркировки белков и обеспечивает точные измерения количества копий белков в клеточных структурах.
Профессор Дирк Питер Хертен, главный исследователь сердечно-сосудистых наук, Бирмингемский университет
«Ожидается, что благодаря своей точности и адаптируемости ProDOL станет стандартным и ценным инструментом в биомедицинских исследованиях, открывая путь для более точных и углубленных исследований клеточных функций. Он также очень универсален, что делает его применимым к различным типам клеток. Условия эксперимента».
«В будущем это может, например, улучшить наше понимание клеточных сигнальных процессов при активации соответствующих иммунных клеток или тромбоцитов в контексте различных заболеваний, включая, помимо прочего, воспаления, иммунодефицит и различные сердечно-сосудистые заболевания».
Реальные приложения и будущие направления
В ходе исследования ProDOL применялся для изучения того, как ВИЧ-1 влияет на иммунный ответ CD4 Т-клеток.
В сотрудничестве с профессором Оливером Факлером из отделения инфекционных заболеваний и интегративной вирусологии Университетской больницы Гейдельберга это продемонстрировало эффективность ProDOL в измерении общего и активного числа копий путем подсчета общего и активного количества вспомогательных белков в небольших сигнальных каскадах иммунных клеток. .
Кроме того, профессор Урсула Клингмюллер из отдела систем биологической передачи сигналов Немецкого онкологического исследовательского центра (DKFZ) внесла свой вклад в разработку зондов для применения в живых клетках, гарантируя надежность технологии и ее применимость в динамических биологических системах.
Исследование финансировалось Немецким исследовательским фондом (DFG), Центром мембранных белков и рецепторов (COMPARE), Академией медицинских наук и другими. Исследователи выражают благодарность различным учреждениям и объектам, поддержавшим проект.
источник:
Ссылка в журнале:
Ташев С.А., и другие. (2024). ProDOL: общий метод определения степени маркировки для улучшения окрашивания и молекулярного подсчета. Природные методы. doi.org/10.1038/s41592-024-02376-6.